酵母双杂交筛选，4缺长了很多菌落，挑4缺单菌落做诱饵引物pcr有诱饵目的条带，而用通用引物做pcr没有条带

答案:2 悬赏:40

解决时间 2021-03-22 00:19

提问者网友：猖狂醉薇
2021-03-21 20:12

是否证明诱饵有自激活，我测诱饵自激活是涂的SD-TRP-LEU平板，在5天左右的时候有针尖大小菌落出现，以为是有突变，继续做的筛选

最佳答案

二级知识专家网友：情窦初殇
2021-03-21 21:23

我遇到过这样的情况，有可能你用的agar含有微量的营养，因此4缺并不是真正意义上的4缺了，换用bacto agar就可以了
还有可能是组氨酸渗透，代谢补偿途径。
另外，按说嘌呤是最严格的限制因素，但是我的酵母不加嘌呤勉强还可以活，因为接种上去的培养基里有很微量的各种营养。
综上，换那种贵的agar，涂板前离心，用双蒸水重悬，另外培养72小时后针尖大的菌落就忽略它吧，选择直径至少要1mm的。

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1楼网友：寂寞的炫耀
2021-03-21 22:08

搜一下：酵母双杂交筛选，4缺长了很多菌落，挑4缺单菌落做诱饵引物pcr有诱饵目的条带，而用通用引物做pcr没有条带

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