经单酶切的粘性末端载体需要去磷酸化处理吗
答案:2 悬赏:70
解决时间 2021-03-22 12:46
- 提问者网友：妖精ξ也會哭
- 2021-03-21 19:36
经单酶切的粘性末端载体需要去磷酸化处理吗
最佳答案
- 二级知识专家网友：傲娇菇凉
- 2021-03-21 20:04
最好处理一下，避免载体切好后自行连接。
全部回答
- 1楼网友：晚安听书人
- 2021-03-21 20:52
方法非常多，列举一两个： 1. 不同的粘性末端不能相连。所以，如果要相连，就要去除不同的粘性末端，进行平末端相连。 粘末端变成平末端有两种方法：klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平。 为了减少载体自连，可以用碱性磷酸酶处理载体。 最后将载体和目的基因链接，构建重组质粒。 2. 设计引物，自带酶切位点，扩增目的基因，直接改变目的基因的酶切位点，然后再用和载体相同的限制酶酶切目的基因，切出相同的粘性末端。 直接将酶切完成的目的基因和载体连接。
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