sds-page为什么跑不出蛋白条带?连marker也没有?请高手指教,尽量详细。
答案:3 悬赏:10
解决时间 2021-02-12 08:05
- 提问者网友:虛偽丶靜
- 2021-02-11 16:39
sds-page为什么跑不出蛋白条带?连marker也没有?请高手指教,尽量详细。
最佳答案
- 二级知识专家网友:我们只是兮以城空
- 2021-02-11 17:12
这个的确是不应该出现的情况,我想应该从分离胶和浓缩胶的配制上找原因,制备凝胶板:
(1)分离胶制备:按表配制20ml 10%分离胶,混匀后用细长头滴管将凝胶液加至长、短玻璃板间的缝隙内,约8cm高,用1ml注射器取少许蒸馏水,沿长玻璃板板壁缓慢注入,约3—4mm高,以进行水封。约30min后,凝胶与水封层间出现折射率不同的界线,则表示凝胶完全聚合。倾去水封层的蒸馏水,再用滤纸条吸去多余水分。
(2)浓缩胶的制备:按表配制10ml 3%浓缩胶,混匀后用细长头滴管将浓缩胶加到已聚合的分离胶上方,直至距离短玻璃板上缘约0.5cm处,轻轻将样品槽模板插入浓缩胶内,避免带入气泡。约30min后凝胶聚合,再放置20—30min。待凝胶凝固,小心拔去样品槽模板,用窄条滤纸吸去样品凹槽中多余的水分,将pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液倒入上、下贮槽中,应没过短板约0.5cm以上,即可准备加样。
(1)分离胶制备:按表配制20ml 10%分离胶,混匀后用细长头滴管将凝胶液加至长、短玻璃板间的缝隙内,约8cm高,用1ml注射器取少许蒸馏水,沿长玻璃板板壁缓慢注入,约3—4mm高,以进行水封。约30min后,凝胶与水封层间出现折射率不同的界线,则表示凝胶完全聚合。倾去水封层的蒸馏水,再用滤纸条吸去多余水分。
(2)浓缩胶的制备:按表配制10ml 3%浓缩胶,混匀后用细长头滴管将浓缩胶加到已聚合的分离胶上方,直至距离短玻璃板上缘约0.5cm处,轻轻将样品槽模板插入浓缩胶内,避免带入气泡。约30min后凝胶聚合,再放置20—30min。待凝胶凝固,小心拔去样品槽模板,用窄条滤纸吸去样品凹槽中多余的水分,将pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液倒入上、下贮槽中,应没过短板约0.5cm以上,即可准备加样。
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- 1楼网友:有钳、任性
- 2021-02-11 18:25
上样缓冲液混合后进行变性,温度必须要超过95°,时间5—10min,如果没把握,可以处理10min。也有可能是漏胶,制胶时封胶要严,操作不熟练时可以多加一点,待聚合后用去离子水加入电泳槽内,看看是否会漏,如果不会把水倒掉,滤纸吸干后再加入凝胶。加样的问题,加样时注意不要刺破凝胶,以避免样品直接漏出。
- 2楼网友:晚安听书人
- 2021-02-11 17:20
一般来说,就算胶配的再不怎么样也会有蛋白条带的,是不是正负极弄反了?
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