小rna反转溶解曲线出现杂峰结果可靠吗

小rna反转溶解曲线出现杂峰结果可靠吗

作用类似于电泳，但是相对于电泳更灵敏，更清晰一些。
通过溶解曲线可以了解目的产物TM值，是否出现杂峰。
一般溶解曲线的结果+电泳的结果和在一起相对比较准确。
当然最后片段也可以测序最终确定目的产物。
主要的是：根据溶解曲线可以确定以下几点：
a.扩增产物是否单一，即是否含有引物二聚体等其它非目的性产物。
如果在90度左右的时候溶解曲线陡然下降，说明产物较纯。
b.可以确定产物的Tm值，一般在90度以上。
可能用途更多，最常用的主要的两点就是这两个了。
针对溶解曲线还有一条相应的曲线，看起来更方便一些。
DNA溶解曲线表示扩增产物的特异性。
曲线横坐标是温度，每个温度点一个。
一般从60到98度纵坐标是荧光强度的变化值（不是强度本身）。
一开始加热的时候，虽然荧光强度比较强，但是由于双链没有解离，所以荧光强度保持不变。
当加热接近于PCR产物Tm时，双链开始解离，荧光强度变小，机器会比较前后2个温度点的荧光强度，然后把2者的差值标在图上。
Tm到达时，有一般双链解离，这时的荧光强度变化最大（峰值）。
再加热，双链全部解离，所以荧光强度的变化又变小了。
PCR产物大小不一，但是只要有相同或者相近的Tm，峰值就有可能在一个位置上。
如果实际测得的峰值和理论计算的吻合，问题不大。
如果有差别，说明有非特异性产物，不要再用SYBR GREEN方法。