什么叫基于细胞的elisa（cell-based elisa）？方法和应用。

什么叫基于细胞的elisa（cell-based elisa）？方法和应用。

基于细胞的elisa，就是说它能测定完整的、经过固定的细胞中磷酸化蛋白及总蛋白水平，而无需裂解细胞。

作为一种全新的ELISA技术，它有两个最突出的优点：1）不需要抽提蛋白、包被微孔板：细胞直接在微孔板里培养，待检测的时候，将细胞固定在微孔板上并进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时，由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定程度上偏离了实际情况。同时不用包被微孔板，简化了实验流程，有助于提高效率。2）可同时检测两种不同蛋白：封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗，然后再加入不同的二抗，加入两种荧光底物，检测两个波长。同时检测两种蛋白的好处是显而易见的，可以减少工作量，此外还可以满足一些特殊的实验需要，例如，需要测定某个蛋白的磷酸化比例，就需要测定磷酸化蛋白的数量和总蛋白的数量，这两个测定在同一次实验进行，有助于消除实验误差，得到更为精确的实验结果。
一般是购买现成的试剂盒，进行使用。

1 、 cell-based elisa 的优点： cell-based elisa （基于细胞的 elisa ）是一种全新的 elisa 技术，有两个最突出的优点： 1.1 不需要抽提蛋白、包被微孔板：细胞直接在微孔板里培养，待检测的时候，将细胞固定在微孔板上并 进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时，由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定 程度上偏离了实际情况。 同时不用包被微孔板， 简化了实验流程， 有助于提高效率。 科研人员在一个 96 孔 酶联板上，便能检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤，样 本的损失也能降到最低，比起其他普通的 elisa 测定方法，这项全新的 elisa 技术能更快速、更方便 地一次检测大量的细胞内蛋白。 1.2 可同时检测两种不同蛋白： 封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗， 然后再加入不同的 二抗，加入两种荧光底物，检测两个波长。同时检测两种蛋白的好处是显而易见的，可以减少工作量，此 外还可以满足一些特殊的实验需要，例如，需要测定某个蛋白的磷酸化比例，就需要测定磷酸化蛋白的数 量和总蛋白的数量，这两个测定在同一次实验进行，有助于消除实验误差，得到更为精确的实验结果。 2 、 cell-based elisa 的两种技术： 某些公司发展了双通道 cell-based elisa 技术； 双通道与单通道 cell-based elisa 比较： 双通道 cell-based elisa ，顾名思义，即一次可以同时检测两种目的蛋白， r&d systems 提供的 cell-based elisa 就是双通道 cell-based elisa ，原理略：（需要荧光检测方式和相应仪器）； 单通道 cell-based elisa ，即一次只能检测一种目的蛋白，他和普通 elisa 的主要区别在于样品处理过 程 3 、 cell-based elisa 的应用： 该产品，最多发展起来的是用于检测磷酸化和非磷酸化蛋白的相对含量； 4 、有 cell-based elisa 产品的公司：目前，多家 elisa 产品提供 商均 提供 cell based elisa 试剂盒， 如 rnd systems ， raybiotech ， ebioscience ， millipore 等公司； 5 、如何自己进行 cell based elisa 实验？ 事实上，根据单通道的 cell based elisa 原理，可以自己建立 cell based elisa 实验系统； 细胞加入培养板中； 加入刺激物或者抑制剂进行培养； 对细胞进行固定或者封闭； 加入第一抗体； 加入 hrp 结合的二抗（二抗的选择，同 western blot ）； 加入底物进行显色；