如何测量RNA浓度

如何测量RNA浓度

一般通过总量，纯度与完整性三大项检测来确认RNA质量：
1总量：微量分光光度计测260nm吸收值计算。
2纯度：微量分光光度计测260nm/230nm吸收值的比值，用于评估有机溶剂残留；260nm/280nm吸收值的比值，用于评估蛋白质污染比例。
3完整性：以Agilent Bioanalyzer进行毛细管电泳(capillary electrophoresis)，并以软件的RIN(RNA Integrity Number)分数评估，10为RNA完整性最好，0为最差。

RNA质检参数中260、280、320、230nm下的吸光度分别代表了核酸、蛋白质、盐浓度和有机溶剂的值。其中：

A230: 测定其它碳源物质，如酚，糖类等。
A260：核酸的吸收峰测，测RNA，DNA，引物等的浓度用的。
A280：蛋白质的吸收峰。
一般的，我们只看OD260/OD280(Ratio，R)在1.8~2.1范围内时，我们认为 RNA中蛋白的污染是可以容忍的，不过要注意，当用 Tris 作为缓冲液检测吸光度时，R 值可能会大于 2（一般应该是<2.2的）。当R1.8时，溶液中蛋白的污染比较明显，可以根据自己的需要决定这份RNA 的命运。当R > 2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了，而纯RNA的OD260/OD280的比值为2.0。