怎么制备多克隆抗体？制备的目的是什么？

怎么制备多克隆抗体？制备的目的是什么？

目的是制备几种单克隆抗体的混杂物。

实验方案根据抗原的性质不同而异。下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明。

1. 用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮肤；
2. 第一次免疫: 用2ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FCA)乳化的抗原(人IgG)下称FCA-IgG)液1ml，每侧脚掌皮下各注入0.5ml。
3. 第二次免疫：间隔10-14天后，于两侧 窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FCA-IgG，每个淋巴结注0.1ml，其余注入淋巴结附近皮下共1ml。如淋巴结未肿大或肿大不明显时，直接注入两侧 窝及鼠蹊部皮下。
4. 间隔7-10天后，从耳静脉采血0.5～1.0ml，分离血清，以双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价(即试血)。效价至少应达到1∶16以上时才能放血。
5. 若效价未达到要求，可用不加佐剂的抗原液(人IgG)耳静脉内注射免疫。即于1周内注射3次，分别为0.1、0.3、0.5ml。间隔1周再试血。如效价达到要求应立即放血。另外,也可在第2次免疫后，以弗氏不完全佐剂(FIA)乳化的抗原(人IgG)(简称FIA-IgG)再免疫1-2次。注射部位、剂量和间隔均同第2次，再试血测抗体效价，如效价达到要求立即放血。

我们实验室现在通用的方案是:
第一次免疫：1ml弗氏完全佐剂(FCA)与100ug蛋白抗原／1mlPBS（一只兔子用量）充分研磨混匀，达到“油包水”的状态，分四点注射：双腋下、腹股沟。
第二次免疫：间隔4周，换用弗氏不完全佐剂，其余同第一次免疫
第三次免疫：同上
测定血清效价，间接ELISA，10ug／ml抗原包被，效价1:64000以上可以放血，也可以再加强免疫一次：生理盐水稀释抗原，耳缘静脉注射，一周内放血