当使用限制酶来获取目的基因时是否一定要用同种限制酶切割DNA和质粒来获取目的基因

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一般情况下是的，因为只有这样才能有相同的黏性末端，目的基因和运载体才能重组。但也有两种不同的内切酶产生相同的黏性末端如G↓ATTCG 和↓ATTC。
还有一种可能是，因为运载体上的基因表达是由方向的（即启动子和终止子的位置），而目的基因的两端末端相同，那么就有可能使目的基因反向接在运载体上，这就可以用双酶切解决，即目的基因和运载体都用相同的两种内切酶，这就可以使目的基因与运载体定向连接了，如：
－－↓－－－－－－↓－－（运载体）￣￣↓￣￣￣￣￣￣↓￣￣（目的基因）
酶1 酶2 酶1 酶2

很抱歉，我只能画出这样的图列，希望能看明白。

在高中的课本上是这么说的 是为了获得同种黏性末端 但其实不然 在真正的基因工程中 会采用两种限制酶同时切割DNA和质粒 为了防止一种限制酶切割会造成出现 DNA-DNA 质粒-质粒 DNA-质粒 三种组合 这样还需要进行选择 所以用两种的话 就只会出现DNA-质粒了 如果你是一个学生 你答题还是答一种 若只是感兴趣那就是两种 希望对你有帮助

现在一般都用回收试剂盒回收了，一般是先跑胶，再把需要的带切下来，用盒子回收就好了。 第二个问题，有可能出现不同条带，一种可能是你的质粒信息不对，里面有你用的酶的酶切位点，所以切出了unexpected的带，另外可能是质粒有突变，正好你点背的突变成了你用的酶的序列。 第三个问题，第一，确定你的胶里加了eb，第二，胶里能看到loading么？不能的话是不是跑反了或者跑出去了，第三，确定你用来酶切的质粒没有降解掉。