PCR反应体系的配备如何？

答案:2 悬赏:30

解决时间 2021-02-19 09:15

提问者网友：挣扎重来
2021-02-19 02:13

PCR反应体系的配备如何？

最佳答案

二级知识专家网友：ー何必说爱
2021-02-19 02:21

根据具体情况而言。

全部回答

1楼网友：没感情的陌生人
2021-02-19 02:57

你好，标准的pcr反应体系： 10×扩增缓冲液 10ul 4种dntp混合物各200umol/l 引物各10～100pmol 模板dna 0.1～2ug taq dna聚合酶 2.5u mg2+ 1.5mmol/l 加双或三蒸水至 100ul pcr反应五要素：参加pcr反应的物质主要有五种即引物、酶、dntp、模板和mg2+ 引物：引物是pcr特异性反应的关键，pcr 产物的特异性取决于引物与模板dna互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板dna序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用pcr就可将模板dna在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则： ①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基：g+c含量以40-60%为宜，g+c太少扩增效果不佳，g+c过多易出现非特异条带。atgc最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致pcr失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性希望有所帮助

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