安捷伦高效液相色谱c18柱的洗柱方法

安捷伦高效液相色谱c18柱的洗柱方法

第一、安捷伦的色谱柱有很多种，所以要分清类型去冲洗。
第二、作为普通C18柱，尤其是硅胶基质的普通C18柱，对酸碱盐以及水，都是造成柱子的损坏的流动相构成。水不能过多（除了带AQ的纯水柱，一般各家品牌都有这款防水柱）我个人认为只要超过80%的水的流动相，都会造成C18的寿命缩短。所以做高水相的流动相分析时请注意选合适的柱子。酸对柱子的损伤是不可逆的，一定要控制PH，我个人认为PH在2以下的都要做好费柱子的准备。碱性条件是对于硅胶基质的C18的弱项，一般的硅胶基质的C18碱性条件都不太耐用，但现在也有碱性PH11的柱子，但比较贵。盐对色谱柱的影响主要是盐析造成的，而且是致命。
第三冲洗方法的问题。冲洗方法根据使用的流动相和样品的不同冲洗方法要加以区分。一般不加酸碱盐，水相也不高的情况（如甲醇水60:40），无需太过冲洗，冲洗的目的就是为了把样品的杂质冲出即可。保存流动相保存即可。酸和碱的条件下，原则上是将酸碱冲出色谱柱，保存在甲醇水即可（如60:40比例可根据要使用的流动相，只要水相不高即可）。盐的条件比较麻烦，处理不好，不仅仅色谱柱出问题而且仪器也比较麻烦。常用的就是高水相流动相甲醇-水（10：90）将盐冲出（注意压力），然后用纯甲醇冲洗（这一步是恢复高水相对色谱柱的损伤），最后保存在一般的甲醇水体系即可。
第四点，冲洗的时候注意是压力，最好是从小流速开始慢慢提升流速到压力许可的范围。冲洗的时间，准确的是流量一般色谱柱的冲洗都要达到10-20倍的柱体积。

柱子说明书上有

C18的柱子，如果流动相里没有盐的话，就可以直接用甲醇冲洗，有盐的话，先用5%-10%甲醇冲洗半个小时，再逐步梯度使用5%-10%甲醇和甲醇冲洗，最后用甲醇封存柱子。

先用低浓度的甲醇水溶液充20-30min，如15%甲醇水溶液，再用纯甲醇冲20min，因为C18柱最好保存在甲醇或者乙腈这种反相有机溶剂里。

根据你的流动相情况看冲洗时一般采用水相较大的流动相进行冲洗，以往经验就是用甲醇-水（10：90）冲洗半个小时以上，至少甲醇也不要低于5%的比例，注意不可用纯水冲洗，那样会损坏你的色谱柱的。

第一、安捷伦的色谱柱有很多种，所以要分清类型去冲洗。
第二、作为普通C18柱，尤其是硅胶基质的普通C18柱，对酸碱盐以及水，都是造成柱子的损坏的流动相构成。水不能过多（除了带AQ的纯水柱，一般各家品牌都有这款防水柱）我个人认为只要超过80%的水的流动相，都会造成C18的寿命缩短。所以做高水相的流动相分析时请注意选合适的柱子。酸对柱子的损伤是不可逆的，一定要控制PH，我个人认为PH在2以下的都要做好费柱子的准备。碱性条件是对于硅胶基质的C18的弱项，一般的硅胶基质的C18碱性条件都不太耐用，但现在也有碱性PH11的柱子，但比较贵。盐对色谱柱的影响主要是盐析造成的，而且是致命。
第三冲洗方法的问题。冲洗方法根据使用的流动相和样品的不同冲洗方法要加以区分。一般不加酸碱盐，水相也不高的情况（如甲醇水60:40），无需太过冲洗，冲洗的目的就是为了把样品的杂质冲出即可。保存流动相保存即可。酸和碱的条件下，原则上是将酸碱冲出色谱柱，保存在甲醇水即可（如60:40比例可根据要使用的流动相，只要水相不高即可）。盐的条件比较麻烦，处理不好，不仅仅色谱柱出问题而且仪器也比较麻烦。常用的就是高水相流动相甲醇-水（10：90）将盐冲出（注意压力），然后用纯甲醇冲洗（这一步是恢复高水相对色谱柱的损伤
），最后保存在一般的甲醇水体系即可。
第四点，冲洗的时候注意是压力，最好是从小流速开始慢慢提升流速到压力许可的范围。冲洗的时间，大家都有个误区就是冲洗时间用分钟或小时计算是不准确，准确的是流量一般色谱柱的冲洗都要达到10-20倍的柱体积。
以上只是大概的过程，具体还有很多的细节，需要一点点的去注意追问我是新手，你说还有好多小细节，可以给我讲讲不，方便加你qq吗我的是我的账号里面的数字追答加了