对PCR扩增的产物进行酶切的方法？

对PCR扩增的产物进行酶切的方法？

Fermentas公司的研究表明，限制性内切酶在 PCR扩增体系中仍然有部分活性，可以通过稀释(3倍以上)扩增混合液，适当提高酶量和反映时间，进行酶切。我个人认为需要对PCR产物进行酶切分析通常是为了克隆或基因表型分析，由于Taq，Pfu等高温聚合酶在酶切温度(37度或更高)下，仍然保持一定的活性，高温聚合酶所具有的聚合或无模板添A或外切修正的功能仍在一定的程度上表现出来，可能会影响到酶切产物末端的正确性。结果是要么装不上去，要么装上去切不下来，测序发现末端引物碱基少了。正确安全的做法是先通过琼脂糖电泳回收产物，然后酶切，酶切可以适当提高酶的用量。一般的做法是从50ulPCR反应中回收的产物，溶解于45ul水中，加入酶，酶切后的产物通过从溶液中回收DNA的方式直接回收，不需要跑琼脂糖电泳。

fermentas公司的研究表明，限制性内切酶在 pcr扩增体系中仍然有部分活性，可以通过稀释（3倍以上）扩增混合液，适当提高酶量和反映时间，进行酶切。个人认为需要对pcr产物进行酶切分析通常是为了或基因表 型分析，由于taq，pfu等高温聚合酶在酶切温度（37度虎弧港旧蕃搅歌些攻氓或更高）下，仍然保持一定的活性，高温聚合酶所具有的聚合或无模板添a或外切修正的功能仍在一 定的程度上表现出来，可能会影响到酶切产物末端的正确性。结果是要么装不上去，要么装上去切不下来，测序发现末端引物碱基少了。正确安全的做法是先通过琼 脂糖电泳回收产物，然后酶切，酶切可以适当提高酶的用量。