感受态细胞放了一个小时多才转化,会对结果有影响吗

感受态细胞放了一个小时多才转化,会对结果有影响吗

放在4℃冰箱内，问题不大
如果放在室温下，那么转质粒（10kb以下）关系也不大，转连接产物就有点不太好，因为感受态的效价至少下降两个数量级左右

感受态细胞（competent cell）：理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来dna的生理状态。 、 　　cacl2法： 　　操作：　 　　1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，细胞膜通透性发生变化，极易与外源dna相粘附并在细胞表面形成复合物。 　　2.此时，将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激（90s），外源dna就可能被细胞吸收。进入细胞的外源dna分子通过复制、表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 　　3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养，筛选出带有外源dna分子的阳性克隆。 　　意义： 　　将构建好的载体转入感受态细胞进行表达，不仅可以检验重组载体是否构建成功，最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验，如蛋白质表达纯化等工作。