退火温度要在正向和反向的tm之间吗

退火温度要在正向和反向的tm之间吗

首先告诉你，Tm值没什么用的，你要注意的是退火温度，比如这是我做16S rDNA的程序，
1）95度 10min（这个一般用94-95度，使DNA完全分开，这步一般固定）
2）95度 30秒（94度、95度都可以，这步几乎也是固定的）
3）退火温度 30-60秒（退火温度你设计引物时会有告诉你的，要是是大片段，将程序建议的退火温度减去5度，小片度就可以按照它给的温度，注意，退火温度是PCR的关键，所以一般需要摸索条件的）
4）72度 延伸时间（这步固定，延伸时间与你P的片段大小和你的Taq酶有关，一般是1-2kb/min，也就是说你做1kb大小的片段就用30-60秒，依次类推）
步骤2-4循环30次
5）72度 5-10min
6）15度 10min（此步可有可无）
希望可以帮到你！！
Tm值在你设计引物的时候才会有用，引物的Tm值一般控制在55-60度, 尽可能保证上下游引物的Tm值一致,一般不超过2度. 如果引物中的G+C含量相对偏低,则可以使引物长度稍长,而保证一定的退火温度.不知道你懂了没？ 当然，我引物Tm值差5度的也有，照样P的很好，呵呵。

我也不确定，还是看看专业人士怎么说。