做肌肉蛋白SDS-PAGE电泳,跑出来的泳带模糊不清且有拖尾的现象,原本应该显示的泳带没有显示出来,或者显示出模糊的一块。只有一条或两条带比较清晰,其他的都模模糊糊。另外考马斯亮蓝染色液如何配制才能取得更好的染色效果(CBB-R250固体)?脱色的时候为何背景颜色不能完全褪色?
回答请具体点不要复制黏贴
貌似我说的不是很明白。哪位做过大鼠肌肉蛋白SDS-PAGE电泳的能否具体说一下方法,特别是点样的时候,我加的是DTT,上样20UL,跑到最后就是跑出3条带。其他的都没跑出来。郁闷。拜托了啊 谁帮忙我再加200分。
sds-page电泳出现问题
答案:6 悬赏:70
解决时间 2021-04-08 12:55
- 提问者网友:依靠
- 2021-04-08 01:29
最佳答案
- 二级知识专家网友:木子香沫兮
- 2021-04-08 03:00
电泳的那个问题是不是你点DNA液的时候没点好,要么就是通电的电压没调好
脱色没完全退色是正常的,看的清楚就可以了……
补充:
那就有可能你的DNA没提的很纯,电泳分离不开来……再做遍吧,我跑过兔子跟河蚌的……应该是这个问题
脱色没完全退色是正常的,看的清楚就可以了……
补充:
那就有可能你的DNA没提的很纯,电泳分离不开来……再做遍吧,我跑过兔子跟河蚌的……应该是这个问题
全部回答
- 1楼网友:萌萌哒小可爱
- 2021-04-08 08:24
这么深奥的问题..你不应该来知道问...
建议你去找些专家问吧
- 2楼网友:一身浪痞味
- 2021-04-08 07:08
1. 上样量不能太多
2. 点样孔要清洁,样品要沉到底部形成一条带
3. 浓缩胶低电压跑
4. marker如果染得很好,染料就没问题。
5. 脱色液配方及配置时间如何?如果时间长,会挥发。脱色时可稍加热。应该 能脱干净。
- 3楼网友:孤伤未赏
- 2021-04-08 06:03
跑出来有拖带现象,那就是你的蛋白质杂了。
跑出的条带不明显的话应该是你提取的肌肉蛋白的浓度太低了,或者染色时间不够。
- 4楼网友:白日梦制造商
- 2021-04-08 05:08
模糊是正常的吧,你跑的又不是单一的蛋白。你用蛋白marker加跑看看,如果marker不拖尾,就说明正常。
另外KAO-G一般的方法配置就好,人家都行,你也行的。
倒是脱色的时候,可以在恒温摇床上摇,隔30min换新鲜的脱色液就会很清晰了
- 5楼网友:瘾与深巷
- 2021-04-08 03:40
可能有以下几个原因:
一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)
二:如果你染色,脱色都没有问题,page胶是不会说谎的
三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是共轭双键的吸收波长,很多物质都会有吸收,如果做亲和层析时咪唑也有吸收,rna在280下也有吸收,可能你测得的是rna?
最后,想问问你的蛋白质marker有没有显示条带?
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