pmd18t载体克隆中的solutioni是怎么配制的

pmd18t载体克隆中的solutioni是怎么配制的

pMD®19-T Vector是线性的，必须是3'段有A的目的基因片段才可以和pMD®19-T Vector连接。 另外pMD®19-T simple是指消除了pUC19载体上的多克隆酶切位点，由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制...

pmd®19-t vector是一种高效克隆pcr产物（ta cloning）的专用载体。本载体由puc19载体改建而成，在puc19载体的多克隆位点处的xba i和sal i识别位点之间插入了ecor v识别位点，用ecor v进行酶切反应后，再在两侧的3’端添加“t”而成。因大部分耐热性dna聚合酶进行pcr反应时都有在pcr 产物的3’末端添加一个“a”的特性，所以使用本制品可以大大提高pcr产物的连接、克隆效率。 由于本载体以puc19载体为基础构建而成，所以它具有同puc19载体相同的功能。此外，本制品中的高效连接液solution i可以在短时间内（约30分钟）完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的control insert（500 bp）还可以用于control反应。 本载体与pmd®18-t vector 相比，本制品的 β-半乳糖苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，菌落显示的蓝色更深。因此，克隆后更容易进行克隆体的蓝白筛选。 简而言之，就是一种可以将taq酶（注意：pfu不具备在产物两端加“a”碱基的能力）扩增的两端带有a碱基的产物连入这种载体，从而通过大肠杆菌扩增的载体，而且可以通过蓝白筛选来筛选阳性克隆，插入成功的为白，不成功为蓝。图谱可以去takara上下说明书。